A disseminação de agentes patogénicos de quarentena representa um risco significativo para a produção agrícola global, ameaçando a saúde das culturas e perturbando os agroecossistemas. A detecção oportuna e precisa-no local é crucial para evitar surtos. A amplificação da polimerase recombinase (RPA) e a DNAzyme multicomponente (MNAzyme) são tecnologias promissoras de detecção isotérmica; no entanto, sua integração tem sido prejudicada pela exigência de DNA de{3}cadeia simples (ssDNA) para ativação da MNAzyme, já que a RPA gera DNA de{4}cadeia dupla (dsDNA). Para resolver isso, desenvolvemos o biossensor OAR-MNA, uma inovadora-plataforma de acoplamento de RPA assimétrica (aRPA) com reciclagem de alvo assistida por MNAzyme-. O biossensor foi aplicado para detectar Acidovorax citrulli, agente causador da mancha bacteriana dos frutos (BFB) em cucurbitáceas. Ao ajustar as concentrações de primers RPA, o aRPA gera ssDNA abundante, permitindo a detecção visual de A. citrulli com limite de detecção de 20 cópias/μL e especificidade perfeita, superando o desempenho do RPA fluorescente. O biossensor demonstrou 100% de concordância com qPCR em amostras de sementes e manteve desempenho robusto em homogeneizado de melão enriquecido. Nossa análise comparativa revelou vantagens do sistema OAR-MNA, incluindo custos de detecção reduzidos e maior aplicabilidade em campo. Quando acoplado a um analisador de DNA portátil, o biossensor fornece-resultados fáceis de usar (+/−), tornando-o ideal para implantação-no local. Além do BFB
detecção, o OAR{0}}MNA foi aplicado com sucesso à detecção do vírus do mosaico verde do pepino (CGMMV), um patógeno de quarentena de RNA que causa graves perdas na produção agrícola de cucúrbita. Ao permitir um diagnóstico precoce e preciso-no local, o biossensor OAR-MNA representa um avanço na tecnologia de detecção de patógenos de plantas, oferecendo uma ferramenta promissora para proteger a produção agrícola global.
