O sistema RPA-CRISPR/Cas12a neste estudo alcança detecção rápida (30–40 min) e ultra{4}}sensível (1 cópia/μL) de HCMV, visando o gene UL123-expresso precocemente, superando os métodos convencionais em testes de amostras clínicas. a viabilidade de diagnósticos-baseados em CRISPR para melhorar o gerenciamento de doenças-relacionadas ao HCMV. A simplicidade e a eficiência do ensaio destacam seu potencial como uma ferramenta de-ponto de-cuidado para ambientes-com recursos limitados.
Padrões de locais de amplificação RPA e seleção de kits.
(A) Desenho do primer RPA em relação à localização dos fragmentos de amplificação. As setas indicam as posições das bases desde o início até ao fim do fragmento amplificado com os iniciadores P1-P6.
(B) A imagem de eletroforese em gel de agarose do produto RPA amplificada com 6 conjuntos de primers HCMV.
(C) Triagem da eficiência de amplificação de kits RPA de diferentes empresas. P: Primer, NC: Controle Negativo.
Os resultados indicaram que o kit AmpFuture exibiu a maior eficiência de amplificação.
Comparação de taxas positivas de MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method e qPCR em amostras clínicas.
Coletamos amostras de sangue e urina de 48 pacientes clínicos. O DNA genômico foi extraído dessas amostras usando o kit TIANamp Genomic DNA, e os resultados da detecção de UL122 foram analisados através do método de sonda fluorescente-de PCR. Comparando nossos resultados com diagnósticos clínicos, nossos métodos identificaram 6 amostras positivas que foram negativas em testes clínicos.
